Bioprospecção de enzimas produzidas por Aspergillus tamarii URM 4634, isolado do solo da Caatinga, por fermentação em estado sólido / Bioprospecting of enzymes produced by Aspergillus tamarii URM 4634, isolated from Caatinga soil, by solid state fermentation

Aldeci França Araujo dos Santos, Vanda Duarte de Andrade, Bianca Alencar Cardoso, Osmar Soares da Silva, Rodrigo Lira de Oliveira, Ana Lúcia Figueiredo Porto, Tatiana Souza Porto, Camila Souza Porto

Abstract


A Caatinga é um bioma exclusivamente brasileiro, com fauna e flora peculiares, proporcionando assim um ambiente propício para micro-organismos adaptáveis à nutrição e clima adversos. O processo de obtenção de enzimas através dos fungos por meio de fermentação em estado sólido é bastante viável por manter o micro-organismo em condições que simulam o ambiente natural. Assim sendo, o presente trabalho teve como objetivo realizar a bioprospecção de enzimas produzidas por Aspergillus tamarii URM4634 isolado do solo da caatinga. O micro-organismo foi mantido com o meio de cultura Czapek por 7 dias à 30°C até ocorrer esporulação. Os esporos foram coletados, padronizados na concentração de 107 esporos/mL e inoculados no substrato de farelo de trigo (FT). A fermentação em estado sólido foi realizada contendo 5g de substrato FT, previamente autoclavado à 121°C por 20 minutos, com um teor de 40% de umidade, por 72 horas, a 30°C em câmara climática.  Após a fermentação foi extraído o extrato bruto (EB), adicionando Após a fermentação o extrato proteolítico foi obtido por adição de 7,5 mL de fosfato de sódio 0,1M, pH 7,0 por grama de material fermentado e homogeneizado na mesa agitadora por 2 horas, submetido maceração durante 1 minuto, agitação orbital 5000 rpm durante 15 minutos a 4°C e em seguida filtrado/centrifugado. O EB foi analisado para diferentes atividades enzimáticas: protease, colagenase, endoglucanase, pectinase e frutosiltransferase. Nas determinações das atividades enzimáticas realizadas, verificou-se altos valores para protease com 116,6 U/mL, podemos destacar a produção de colagenase com 210,6 U/mL. Ainda pode ser verificada atividade de 0,41 (U/mL) de endoglucanase; 0,49 (U/mL) pectinases e 10,7 (U/mL) de frutosiltransferase. O perfil obtido apresentou nove bandas proteicas com pesos moleculares de 14,4 a 97,0 kDa.  A natureza do composto proteolítico (enzima) foi confirmada por zimograma para as atividades de frutosiltransferase e protease, onde a banda hidrolisada branca correspondeu à posição da frutosiltransferase, sendo visualizado duas bandas com pesos moleculares distintos, indicando assim a presença de duas diferentes enzimas com a mesma atividade. Para a atividade proteolítica foi observado a presença de apenas uma banda. Os resultados demostraram que A. tamarii URM4634, foi capaz de produzir todas as enzimas testadas, com substrato de baixo custo utilizando subprodutos agroindustriais. Tendo um maior potencial de utilização industrial para as proteases, no qual foi obtido altos valores de atividade, em destaque para a produção de colagenases.   

 

 


Keywords


Biotecnologia; Produção; Aspergillus; Colagenase, Zimograma.

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DOI: https://doi.org/10.34117/bjdv6n5-135

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