Uso de crioprotetores para a preservação de coleções microbianas mantidas para PD&I / Use of cryoprotectors for the preservation of microbial collections maintained for RD&I
Palavras-chave:
Criopreservação, Skim Milk, Glicerol.Resumo
O armazenamento de microrganismos por longos períodos é importante para a sua utilização em Pesquisa, Desenvolvimento & Inovação (PD&I). A correta preservação das cepas é fundamental para evitar contaminações e mutações, podendo levar à perda das características morfológicas, fisiológicas e genéticas. O Laboratório de Biotecnologia do CEPGM da PESAGRO-RIO realizaexames para o diagnóstico, a prevenção e o controle de enfermidades em animais de produção, e mantém a “Coleção de Microrganismos Patogênicos para Animais de Produção”. Até 2010 as cepas eram mantidas à -20ºC, sem crioprotetores. Porém em 2011 foi adquirido um ultrafreezer -80ºC, e 595 cepas congeladas à -20ºC foram reativadas e avaliadas quanto à viabilidade, identidade e pureza. Dessas, apenas 64 (10,76%) estavam viáveis. Desde então segue-se o protocolo de preservação à -80ºC, utilizando o Skim Milkcomercial com adição de 10% (p/v) glicerol, que são autoclavados separadamente a 121ºC/15min, e em seguida homogeneizados e acondicionados em criotubos de 3mL,levados ao freezer -20ºC por 2 dias, e posteriormente acondicionados no ultrafreezer -80ºC. Do total de 632 cepas bacterianas isoladas de 2011 a 2018, 442 cepas (69,93%) estão preservadas à -80ºCemSkim Milk com glicerol, e 190 (30,07%) à -20ºC em BHI com glicerol, para futuras pesquisas. Em 2016 e 2017 foram repicadas 427 cepas isoladas entre 2013 e 2015, que estavam mantidas à -80ºC, e 100% apresentaram-se viáveis. Os resultados indicam que o uso de crioprotetores favoreceu a preservação e a estabilidade das cepas, tanto no congelamento à - 80ºC como à -20ºC.
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